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四环素类药物ELISA检测试剂盒技术参数以及操作步骤
发布时间:2019-09-12   点击次数:21次

四环素类药物ELISA检测试剂盒技术参数以及操作步骤

 

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度:0.3ppb(ng/ml)

2.2 反应模式:37℃,30min~30min~15min

2.3 检测下限:

组织、肝脏、鸡蛋………………1。8ppb

蜂蜜………………………………12ppb

尿样………………………………3ppb

2。4 交叉反应率:

四环素………………………………100%

金霉素………………………………340%

土霉素………………………………51%

强力霉素……………………………8。5%

 2。5 样本回收率:

组织、肝脏、鸡蛋…………85±20%

蜂蜜…………………………75±20%

尿样…………………………80±20%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

高浓度标准品溶液1瓶:(1ml/瓶)1。0ppm(高标准液有挥发性,需注意密封)

标准品溶液0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb(均为空瓶子,现配现用)。

酶标记物(红盖)…………………11ml

抗体工作液(蓝盖)………………5。5ml

底物液A(白盖)……………………6ml

底物液B(黑盖)……………………6ml

终止液(黄盖)………………………6ml

20X浓缩洗涤液(白盖)……………40ml

5X复溶液(黄盖)…………………50ml

说明书………………………………1份

3酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

实验开始前需配制:

1)用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。

2)配制标准品应用液;低浓度的标准品不稳定,需现配现用。

在0ppb的瓶中加复溶液3ml,0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb的瓶中分别加复溶液2ml,24.3ppb的瓶中加复溶液2.93ml。

标准液6:取1.0ppm高浓度标准品溶液73ul加入装有2.93ml 复溶液24.3ppb的瓶中,盖紧,混匀,浓度即为24.3ppb。

标准液5:取1ml标准液6加入装有2ml 复溶液8。1ppb的瓶中,盖紧,混匀,浓度即为8。1ppb。

标准液4:取1ml标准液5加入装有2ml 复溶液2.7ppb的瓶中,盖紧,混匀,浓度即为2.7ppb。

标准液3:取1ml标准液4加入装有2ml 复溶液0.9ppb的瓶中,盖紧,混匀,浓度即为0.9ppb。

标准液2:取1ml标准液3加入装有2ml 复溶液0。3ppb的瓶中,盖紧,混匀,浓度即为0。3ppb。

标准液1:直接使用复溶液,浓度即为0ppb。

3。1 编    号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。

3.2 加样反应:加标准品应用液或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗体工作液50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,37℃避光反应30分钟。

3.3 洗    涤:将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,最后用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。

3.4 加酶反应:加酶标记物100µl/孔,37℃避光反应30分钟。

3。5 洗    涤:同上

3.6 显    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,37℃避光显色15分钟。

3。7 终    止:加终止液50µl/孔,轻轻振荡混匀,终止反应。

3。8 测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。

 

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