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链霉素ELISA检测试剂盒样本前处理以及注意事项
发布时间:2019-09-12   点击次数:72次

链霉素ELISA检测试剂盒样本前处理以及注意事项

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知:

实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。

5。2 配液:

配液1:0.05M  PB缓冲液

    称取12.9g Na2HPO4·12H2O和2.175g NaH2PO4·2H2O加去离子水1000ml溶解。

配液2:0.04M磷酸(蜂蜜样专用)

    1ml浓磷酸加去离子水定溶至360ml。

配液3:1M NaOH(蜂蜜样品专用)

    称取4g NaOH加去离子水定溶至100ml。

配液4:复溶液

    将5×复溶液用去离子水5倍稀释,用于样本的复溶,复溶液在4℃环境可保存一个月。

5。3 样本前处理步骤:

5。3。1 组织样本

1)称取2±0.05g去除脂肪的匀浆样品,加入8ml 0.05M PB缓冲液,振荡5min,置56℃水浴环境放置30min;

2)室温4000r/min以上离心10min;

3)取1ml上清液加入1ml正己烷,充分混匀,室温4000r/min以上离心5min;

4)去除上层有机相,取50ul下层液,加入450ul 稀释后的复溶液,混合30s;

5)取50ul用于分析。

    样本稀释倍数:40     检测下限:4ppb

5.3.2 蜂蜜、蜂王浆

1)称取2±0.05g 样品,加入4ml 0.04M磷酸,振荡至完全溶解,室温4000r/min以上离心5min,直至清亮。(蜂蜜样品可不用离心直接进行第2步);

2)加入450ul 1M NaOH将PH值调至7-9之间(蜂王浆样品需将全部上清移至另一干净离心管中调节PH值至7-9之间),室温4000r/min以上离心5min ,直至清亮;

3)取50ul上清液,加入450ul稀释后的复溶液混匀,混合30s;

4)取50ul用于分析。

    样本稀释倍数:20     检测下限:2ppb

5。3。3 牛奶、奶粉

1)称取2±0。05g样品,加入8ml 0。05M PB缓冲液,振荡5min,置56℃水浴环境放置30min;

2)室温4000r/min以上离心10min;

3)去除上层脂肪,取50ul中层澄清液体,加入450ul 稀释后的复溶液,混合30s;

5)取50ul用于分析。

    样本稀释倍数:50     检测下限:5ppb

6 注意事项

6。1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

6.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

6.3 混合要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。

6。4 在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。

6.5 不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6。6 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0。5个单位(A450nm< 0。5 )时,表示试剂可能变质。

6.7 反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。

 

 

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