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如何正确操作马白细胞介素4(IL-4)ELISA试剂盒?
发布时间:2019-10-23   点击次数:53次

如何正确操作马白细胞介素4(IL-4)ELISA试剂盒?

 

正确操作马白细胞介素4(IL-4)ELISA试剂盒的前提是正确处理样本,下面是常用样本的处理方式

1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2。  血浆用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3。  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4。  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

其次我们需要准备未提供的试剂和器材

酶标仪(450nm),高精度加样器及枪头:0。5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

37℃恒温箱蒸馏水或去离子水 

然后了解试剂盒组成成份

 

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

8孔×12

8孔×6

标准品

0.3mL*6管

0。3mL*6管

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

说明书

1份

1份

自封袋

1个

1个

1.  标准品浓度依次为:8、4、2、1、0.5、0.25 μmol/mL

2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

 

了解马白细胞介素4(IL-4)ELISA试剂盒的注意事项

1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2。 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6。 在储存和温育时避免强光直接照射。

7。 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

11。试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 

最重要的是操作步骤

1,. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3。 样本孔待测样本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5。 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

 

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